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SARS-CoV-2 假病
假病毒描述:
SARS-CoV-2假病毒以HIV病毒为骨架,外面包被SARS-Cov-2的 Spike 蛋白,能够感染过表达人ACE2的细胞。可用于测试研究阻断病毒侵入的中和抗体或其它药物。假病毒只能单次感染,不能复制,安全性高,可在P2级实验室使用。
假病毒参数:
产品名称 | SARS-CoV-2 假病毒 |
货号 | VS-SC-0001 |
荧光基团 | eGFP和Luciferase |
生物安全防护措施 | P2级实验室 |
包装 | 100~200ul |
感染滴度 | 2×105 TU*(基于hACE2-COS7细胞) |
拷贝数 | >108 |
保存 | -80℃ |
* TU(transfection unit),1TU=使1个细胞发出绿色荧光。
假病毒制备:
米乐m6app下载安卓将Spike蛋白表达质粒、包装质粒、转移质粒共转染到293T细胞内,包装出以SARS-CoV-2-Spike为表面衣壳蛋白的假病毒。假病毒同时带有Firefly Luc和eGFP标记,可以通过有Firefly Luc和eGFP检测感染。示意图如下:
注意事项:
1) 病毒使用PEG8000浓缩,会有血清蛋白沉淀,外观浑浊,但不影响使用。
2) 病毒干冰运输,-80℃保存,使用前室温融化。
使用方法:
1. 第一天,96孔板每孔接种5×103个hACE2-COS7细胞。
2. 第二天,除去培养板里的培养基,新鲜培养基(100ul/孔)与假病毒2×103 TU和Polybrene混合(5ug/ml终浓度),加入培养孔,培养板离心(1200g x 2 Hour,4℃)。
(2×103 TU时,luciferase的亮度约为1×106)。
3. 离心感染的细胞,吸干净培养基,再用PBS洗一次;每孔加入30ul 0.25%的胰酶,37℃孵育5min,加入100ul完全培养基,继续培养。
4. 感染后继续培养3天(每天换液),进行luc检测,也可以观察eGFP荧光(根据情况更换培养基)。